Не Новичок

2021-06-08 01:27:26 Хитропиканка

Краткое содержание предыдущих серий. В конце апреля дон Густаво раскрывает страшные тайны производителей Спутника, рассказывая о реплицирующихся векторах в вакцине и запрещает именем ANVISA регистрацию препарата в Бразилии. Дон Гамалея защищает доброе имя своего детища пресс-релизами, исками, твитами и заявляет, что в вакцине реплицирующихся векторов нет, и документы это подтверждают.

Дон Густаво в ответ заявляет, что хоть действительно в руках флаконы не держал и сам тесты не проводил, но все выводы делает на основании предоставленных доном Гамалеем отчётов. И даже показывает в презентации скриншоты документов, в которых в графе RCA стоят цифры, отличные от нуля. Хитрый дон Густаво умалчивает, что документы эти от других серий, произведённых ещё до регистрации, и к сериям, предназначенных для поставки на родину Пеле, отношения не имеющих.

Не стерпев публичного унижения, из щукинских фавел отвечают, что дон Густаво задолго до апрельских разоблачительных речей запрашивал информацию об RCA в вакцине. Дон Гамалея утверждает, что 26-го марта отправил ценной бандеролью документы о качестве серий, предназначенных для Бразилии, но коварный дон Густаво скрыл эти бумаги и показал старые, от других партий вакцины. Зрители затаили дыхание, гадая, кто же из них блефует.

В следующей серии дон Гамалея опубликовал полный ответ на речи дона Густаво, приложив оригинал письма от 26 марта, о котором говорилось в предыдущей серии. Из документа зрители узнают, например, что согласно статье 16 бразильского закона 14.124/2021, регистрация в Бразилии должна быть произведена автоматически, если есть одобрение вакцины от регуляторов хотя бы одной из референтных 11 стран. На момент рассмотрения заявки, такое одобрение было от трёх стран (Россия, Аргентина, Индия).

Но самое интересное было на странице 9 и далее, а именно – отчёт о цитопатических тестах на наличие RCA. Количество бляшкообразующих единиц, говорящих о наличии реплицирующегося вектора, было 0 (ноль) во всех сериях. Поскольку предел обнаружения такой методикой – 50 RCA на дозу, то в соседнем столбце так и записано: «менее 50 RCA на дозу». Что включает значение 0 (ноль) в том числе. Зрители могут ознакомиться с полным текстом документа в титрах после сегодняшней серии.

Спустя некоторое время неожиданно в ход событий вмешивается дон Альбертович, предоставив технические документы от лица российского регулятора. Поговорив как дон с доном, он при помощи доброго слова и досье (что, как известно, лучше, чем просто доброе слово) убеждает Густаво принять взвешенное решение. Показательно уйдя на три серии изучать документы, Дон Густаво в конце концов разрешает использовать Спутник в шести штатах, обложив для виду это использование матом тридцатью тремя условиями.

Почитатели Спутника радуются и кидают в воздух чепчики ушанки. Хулители Спутника игнорируют новости из страны пампасов, делая вид, что за свои слова отвечать не надо. СМИ-иноагнцы и блогеры-эмигранты упражняются в формулировках «да, но…». И первым, и вторым, и третьим особо нет дела до простых бразильцев.

В следующей серии: Герофарм и производитель Uniao Quimica Farmaceutica Nacional S/A подписали меморандум о поставке и производстве ЭпиВакКороны в Бразилию. От этой новости у дона Густаво случается инсульт от тромбоза, и он впадает в кому. Выясняется, что он до этого тайно вакцинировался англо-шведской другой прививкой, и его настигла побочка. По крайней мере так утверждают двое его лечащих врачей: дон Боширу и дон Петро.

А пока продолжаем наблюдение. Искренне ваш, (под)опытный кролик. Открыть/Комментировать

2021-05-31 01:07:17 Шок! Сенсация! Срыв покровов! 92% не равно 100%!

Число полностью вакцинированных, как улитка на склоне, уверенно подползает к отметке 12 млн. Но волны ковида гасят этот слабый ветерок вакцинации. Даже официальные цифры заболеваемости взяли курс вверх. При этом цифра в 12 млн сама по себе довольна большая. Ну то есть относительно населения страны она маленькая – всего-то восемь с лишним процентов, но сама по себе внушительная.

Даже если взять за основу заболеваемость в основной группе из статьи по третьей фазе Спутника в Ланцете, а это 0,1%, то из полностью привитых у нас заболеет 12 тысяч человек. И это за 48 дней, ибо таков был средний срок наблюдения в статье. Понятно, что фоновая заболеваемость тогда была другая, считать надо несколько по-другому, но порядок цифр будет примерно такой же.

Так или иначе, речь идёт про то, что привитые болеют, и болеют тысячами. Просто в силу того, что количество привитых становится всё больше, у многих появляются знакомые (в том числе в зеркале), которые заболели после вакцинации. И это, как говорит г-жа Малышева, норма. Более того, мы видим далеко не все случаи, потому что есть ещё и бессимптомное течение у привитых.

Да, вакцинированный человек может быть носителем вируса. Меньшее время, меньше его выделять вовне, но всё-таки может. Чётких данных по Спутнику на этот счёт нет, но вирусная нагрузка при применении матричных вакцин уменьшается более чем в 2 раза по сравнению с обычными болеющими. Ещё больше данных по снижению частоты бессимптомного течения здесь. Иными словами, вакцины с задачей уменьшения распространения вируса справляются.

Справляются, но не на 100%, поэтому считать привитого человека априори безопасным для окружающих – это излишне оптимистичная точка зрения. Не нужно думать, что раз получил вакцину – считай, уже «в домике». Но повод ли это говорить, что раз так, то «от вакцин толку никакого»? Тоже нет. Доброе слово Голова на плечах и пистолет вакцина работают лучше, чем просто голова на плечах. Соблюдайте меры предосторожности, как если бы вы были не привиты, и держите антигенный тест наготове, чтобы провериться при первых подозрениях в случае необходимости.

Окей, а если говорить про тех, кто заболел с симптомами? Если вакцинированный заболел, то он в подавляющем большинстве случаев переносит ковид легко. Градация – тут в приложении 2. И как бы ни было обидно забелеть привившись, это скорее повод не сетовать, что прививка не сработала, а задуматься, какова была бы тяжесть, если бы вакцину не получил.

Ситуацию усугубляет тотальный дефицит систематизированной (да хоть какой бы, чо уж!) информации от Минздрава по нежелательным явлениям, по реальной эффективности вакцин в России, по их активности в отношении новых вариантов вируса. Какие-то данные можно выудить только из мексиканских и аргентинских отчётов, но этого пока маловато. Отсутствие информации на больших выборках приводит к тому, что каждый, видя в своём кругу или на своей шкуре, что вакцина не работает на 100%, будет придумывать себе эту эффективность и уровень побочек сам, исходя из своего личного уровня ипохондрии и скепсиса.

Новые варианты пришли, они уже здесь, и будут появляться новые. Будут появляться во многом благодаря тому, что вирусу дают резвиться по-полной, затягивая с прививками. А новые варианты имеют шансы пробивать защиту чаще. И чем дальше, тем больше тезис «мы все либо привьёмся, либо переболеем» имеет шансы трансформироваться в «мы все либо привьёмся, либо переболеем, либо привьёмся и переболеем». Ну и дважды-трижды переболеть в этой ситуации тоже милое дело. Пока что эффективность остаётся 90%+, а дальше будем посмотреть.

Вакцина – это инструмент снижения персонального и коллективного риска. Это инструмент уменьшения распространения вируса в популяции, снижения риска заболеть, а если заболел – снижения тяжести. Но риск этот уменьшается не до нуля, и это надо понимать довольно чётко.

А пока продолжаем наблюдение. Искренне ваш, (под)опытный кролик. Открыть/Комментировать

2021-05-17 00:29:58 После первой прививки Открыть/Комментировать

2021-05-17 00:29:15 Партизанский ковид и третья волна.

Неделя ознаменовалась тем, что нерешительная кривая заболеваемости таки начала своё восхождение вверх. Власти культурной столицы рапортуют о росте на 26%, в сравнении с прошлыми выходными, госпитализаций, в Москве в пятницу фиксируют 3 818 случаев, а в личку начинают сыпаться сообщения: «Я, кажись, зашкварилсяковидился, что мне делать».

Чем дальше, тем сложнее проявлять эмпатию к заболевшим непривитым гражданам. Недавно было высказано мнение, что многие «испытывают раздражение из-за того, что вся страна будет вынуждена продолжать страдать из-за ограничений в третью волну, просто потому что кто-то решил поболеть». Именно в такой форме, «решил поболеть». Потому что отказ от вакцинации, если это не медотвод, - это уже сознательное решение поболеть. Можно приводить какие угодно отмазки аргументы, но если человек выбирает не прививаться, он таким образом выбирает переболеть. Тчк.

Цифры, которые мы видим в сводках с ковидного фронта, конечно же, не отражают истинного положения дел. Чтобы мониторить более близкие к реальности цифры, можно смотреть на сводки из Коммунарки, которые Герой труда Денис Проценко исправно выкладывает у себя в фб. Госпитализации, в отличие от простой статистики заболеваемости, замести под ковёр сложнее. Можно следить за суррогатным показателем – количеством запросов в Яндексе о симптомах ковида. Чем больше запросов, тем больше заболеваемость, - корреляция показана не единожды.

Официальные цифры могут быть до такой степени статистикой не только потому, что кому-то греют душу невысокие показатели прироста. Один из значимых факторов – пофигизм граждан на грани разгильдяйства. Многие просто перестали бояться ковида, и лечатся сами. Почувствовали симптомы – погуглили, да, мол, скорее всего оно. Останусь дома, поработаю удалённо, тест сдавать не буду, чтобы не посадили на карантин и мониторинг. Такой вот подпольный, партизанский ковид.

И работодателю, и работнику выгодно, чтобы случай нигде не фигурировал. "А как же диагностика?", - спросите вы. Продвинутые партизаны знают, что можно не идти в лабораторию, а заказать, не выходя из дома, антигенный тест на каком-нибудь Я.Маркете или Озоне с доставкой за час, и за 10 минут уже узнать результат. По цене и чувствительности тот же ПЦР. Анонимно, бесплатно без регистрации и СМС. И в итоге огромное количество случаев лёгкого течения остаются за бортом официальной статистики. Так и партизанят, перенося ковид без отрыва от производства, если не загремят в стационар.

Может, именно поэтому АГ-тесты как-то подозрительно резво пропали почти со всех маркетплейсов, остались только в интернет-аптеках. Видать, регуляторы задумались, нужно ли оставлять такую альтернативу ПЦР общедоступной.

Но как бы себя ни вели цифры официальной статистики, реакция граждан, похоже, будет примерно одинаковая. Если заболеваемость расти не будет, люди расслабятся и прививаться не будут. Типа, зачем. Если же статистика полезет вверх, то скажут, что прививаться посреди вспышки уже поздно. Запасаемся попкорном, пульсоксиметрами и тестами, и ждём, чем же всё-таки аукнутся майские шашлыки, и что нам привезут в качестве сувениров отпускники из тёплых краёв.

А пока продолжаем наблюдение. Искренне ваш, (под)опытный кролик. Открыть/Комментировать

2021-05-15 01:49:52 Вакцины-людоеды

В инстаграмах последнее время активизировались женщины с повышенной социальной ответственностью, тиражирующие модные в Америке возражения об этичности использования векторных вакцин. Мол, что они получены ценой убитых младенцев, ибо выращиваются векторы на эмбриональных клетках.

Речь идёт как об упоминавшихся ранее HEK293, на которых растят Спутник и Ваксзеврию (АстраЗенека), так и о PER C6, в которых выращивают 26-й серотип для Джонсоновской вакцины. Причём, как показывают 15 миллионов слитых в унитаз в Балтиморе доз Джонсона, эти палочки Twix лучше делать на разных заводах. .

Эти клеточные линии удачны как минимум по трём параметрам. Во-первых, они способны расти в жидкой среде в виде суспензии, что архи удобно для производства вакцин. Во-вторых, они делятся бодро и практически неограниченно. В-третьих, в них удалось вставить ген E1, так нужный для безопасной сборки векторов. То есть звёзды сошлись в довольно редкой конфигурации, чтобы получились эти клеточные линии. При этом HEK 293 была получена в 70-х годах из почек человеческого эмбриона, а вторая – из клеток эмбриональной сетчатки.

Тут следует отдельно остановиться на том, что этот эмбриональный материал – абортивный. И вопрос, был ли этот аборт по медицинским показаниям или нет, - пожалуй, главный вопрос в дискуссии об этичности. Потому что если эмбрион был нежизнеспособен, то и обсуждать особо нечего. При этом создатель HEK 293 профессор Ван дер Эб через 25 лет после создания линии на слушаниях в FDA включал склеротика и не мог точно сказать, здоров ли был эмбрион, да и вообще не очень был уверен, что это именно почки. Ну, он дедушка 1934-го года рождения, ему простительно.

Впоследствии генетики изучили геном, и там оказалось аж 64 хромосомы вместо положенных по спецификации 46. В том числе по три Х и по четыре 17 и 19 хромосомы. Какие нарушения были изначально, а что стало следствием стабилизации культуры клеток, - уже концов не найдёшь. Поэтому любители покопаться в этичности использования этой линии обречены на вечную неопределённость. Был ли эмбрион жизнеспособным или нет, уже никак не выяснить. А то, что сейчас растёт в биореакторах на заводах, имеет с ним уже слишком мало общего.

И раз уж зашла речь про использование культуры клеток, и насколько это этично, то нельзя обойти стороной самую популярную в мире линию HeLa. Дело в том, что эти клетки были получены из злокачественной опухоли шейки матки барышни по имени Генриетта Лакс аж в далёком 1951 году. Особенность этих клеток заключается в том, что они неограниченно делились. Обычные клетки имеют предел Хейфлика, после которого клетка ломается, а эти размножаются бодро и бесконтрольно как те кролики в Австралии. Кроме того, они легко культивируются и даже способны расти вне пробирки. Некоторые даже предлагают выделить эту культуру клеток даже в отдельный биологический вид.

В общем, получилась очень удачная во всех отношениях клеточная линия, ставшая на долгие десятилетия основной культурой в биологической науке. И раздаются голоса, что использование HeLa тоже неэтично, поскольку клетки были взяты без ведома самой Генриетты.

Но самый пикантный момент заключается в том, почему же они были взяты без её спроса. А дело всё в том, что она была негритянкой, и это было начало в 50-х годы в Америке. Маленькие чёрные мальчики и девочки в Алабаме ещё не взялись за руки с белыми мальчиками и девочками, а до Джорджа Флойда было ещё 70 лет.

Вот теперь и получается, что белые цисгендерные учёные десятилетиями заставляют чернокожее население работать на себя даже после смерти. И, учитывая, что клеточная линия HeLa по сути бессмертна, эта музыка будет вечной. Это уже не HeLa, а натуральный Hell, не иначе.

Запасаемся попкорном и ожидаем, когда же эту тему оседлает BLM.

А пока продолжаем наблюдение. Искренне ваш, (под)опытный кролик. Открыть/Комментировать

2021-05-10 01:55:39 Но самое главное, что нужно знать про эту историю – это то, что проблема RCA в данном случае не стоит и выеденного яйца. Те самые гипотетические до 100 частиц (которых, как заявляет РФПИ, в поставляемых сериях вакцине нет) при попадании в организм абсолютно не факт, что смогут размножиться хоть в каких-то товарных количествах. Как писалось выше, 1 БОЕ для аденовирусов – это около 100 вирионов. И это в чашке Петри, где нет злых иммунных клеток.

Можно было бы просто сделать в разные дни от введения серию количественной ПЦР, нацеленную на Е1 ген Ad5, и посмотреть динамику. Даже если ПЦР изначально будет положительная (что вряд ли), дальнейший рост или падение титра расставил бы всё более-менее на свои места.

Посмотрим, как дальше будет развиваться этот бразильский сериал.

А пока продолжаем наблюдение. Искренне ваш, (под)опытный кролик. Открыть/Комментировать

2021-05-10 01:55:39 По сути есть два способа, как можно обнаружить RCA в препарате. Первый – это количественный ПЦР, когда мы подсчитываем количество копий гена Е1 аденовируса 5 типа во флаконе. Почему именно его, мы разбирали в предыдущем посте. Второй – это цитопатический тест, при котором чувствительную культуру клеток обрабатывают препаратом, и смотрят, есть ли очаги заражения (бляшкообразующие единицы, БОЕ). Причём предпочтительным в индустрии считается именно второй способ. Его издержки таковы, что невозможно высчитать количество RCA с точностью до штуки: используются диапазоны значений.

Какие же стандарты вообще есть по поводу RCA в вакцинах? Часто ссылаются на гайд FDA, где указано, что раньше нормой было не более 1 БОЕ RCA на дозу. Но теперь, мол, допускается установление производителем своей спецификации по нормам при условии, что он покажет допустимость рисков для конкретной когорты пациентов, дозы, пути введения и т.д. Кстати, 1 БОЕ для аденовирусов обычно содержит до 100 (sic!) вирусных частиц. Но вот беда: этот гайд, во-первых, от 1998 года и после него вышел более свежий, а, во-вторых, он вообще не про вакцины. Называется «Guidance for Human Somatic Cell Therapy and Gene Therapy».

Более свежий документ FDA, на который в том числе ссылается г-ндон Мендес, датирован январём 2020 года. И он тоже про генную терапию, а не про вакцины. Да, генная терапия при помощи векторов до степени смешения похожа на векторные вакцины, но это формально другой вид лекарств, в том числе с другими применяемыми дозами и путями введения. Использовать этот гайд для формальной оценки заявки на регистрацию вакцины – это очень сомнительный шаг.

Но даже если и так, то гайд носит лишь рекомендательный характер: «FDA’s guidance documents, including this guidance, do not establish legally enforceable responsibilities. <…> The use of the word should in FDA’s guidance means that something is suggested or recommended, but not required».

Если всё же брать этот гайд за основу, он предусматривает 1 RCA на каждые 3х10^10 вирусные частицы. То есть на дозу в Спутнике 1,5х10^11 (беру верхнюю границу), получается 5 RCA на дозу. Что вполне может быть в диапазоне «менее 100». А может и не быть. Иными словами, трактовать сам факт наличия допусков по этому показателю в документации как однозначный харам, нельзя. А вот попросить конкретные цифры у производителя – можно.

Вот если в Европе ЕМА хочет регулировать именно векторные вакцины, то оно выпускает документ именно по ним. И на него в том числе ссылается ANVISA. Читаем, что в нём написано: «Absence of replication-competent viral vector». То есть быть RCA в вакцине не должно в принципе. И это таки (гипотетически) проблема, если брать документы, которыми козыряет ANVISA, и пытаться делать далеко идущие выводы. А можно посмотреть на результаты анализов от Генериума, что в вакцине RCA нет. Или, что лучше, взять и сделать их в независимой аккредитованной лабе, как это сделала, например, Венгрия.

При этом конспирологи обращают внимание публики на то, что вакцины бигфармы «в домике». Как мы уже выяснили в предыдущем посте, 26-й аденовектор не может давать RCA. Поэтому джонсоновкой вакцине этот скандал выгоден, хоть они и используют другую клеточную линию. Шимпанзиный аденовирус тоже таким не страдает. Матричные вакцины - вообще мимо по понятным причинам. А вот русские и китайцы – под прицелом.

Забавно, что Минздрав США на голубом глазу в своём свежем отчёте о деятельности пишет (стр. 48): «Combatting align influences in the Americas: OGA used diplomatic relations in the Americas region to mitigate efforts by states, including Cuba, Venezuela, and Russia, who are working to increase their influence in the region to the detriment of US safety and security. <…> Examples include using OGA’s Health Attaché office to persuade Brazil to reject the Russian COVID-19 vaccine...». Э - этика. Открыть/Комментировать

2021-05-10 01:55:39 Не более тысячи, менее ста, но всё-таки ноль.

Не так давно бразильский медицинский регулятор ANVISA отказал в регистрации Спутника на территории Бразилии. Был составлен довольно внушительный перечень разнокалиберных претензий. Наибольшую ажитацию в обществе вызвал вопрос о репликативно-компетентных аденовекторах (RCA) в вакцине. Что это за зверь, мы разбирали в предыдущем посте.

На совещании регулятора Густаво Мендес в своём докладе аж красным цветом выделил в презентации, что реплицирующийся аденовирус бы обнаружен во всех представленных партиях. Закон Мёрфи в приложении к публичным коммуникациям гласит, что если ваши формулировки допускают, что вас можно понять не так, то вас обязательно поймут не так. Из вышеозначенной фразы дона Мендеса многие сделали вывод, что Гамалея предоставила партии вакцины на анализ, и ANVISA провела тесты, которые показали присутствие RCA в них.

РФПИ тоже понял именно так, тут же встал на дыбы, и твиттер Спутника и начал строчить сообщения как из Калашникова, с которым так любят сравнивать русскую вакцину. Мол, решение политическое, и оно не имеет ничего общего с наукой. РФПИ приглашал публично обсудить решение в бразильском парламенте, и даже заявил, что народ Бразилии будет ждать решения Верховного суда. А мужики-то не знают! После этого, страшно сказать, обозвал решение ANVISA фейкньюс и выдал пространный пресс-релиз разоблачающий «дезинформацию». Учитывая, что до этого в аккаунте были сообщения о том, что мол, США давят на регулятор, и решение может быть необъективным, махать кулаками РФПИ начал ещё до драки.

Назвать такую позицию конструктивной довольно сложно. Так с регулятором у ровных пацанов базарить не принято. С другой стороны, когда тебе втирают какую-то дичь отказывают и говорят, что обнаружили в вакцине RCA, а ты точно знаешь, что образцов не передавал, то это не по понятиям обескураживает.

В ответ ANVISA собирает прессуху, на которой таки признаёт, что да, никаких образцов у них не было, и претензии их носят главным образом, документарный характер. То есть они RCA обнаружили не во флаконах, а в документах. Мол, у Гамалеи есть указание на RCA в их же спецификациях. На видео в презентации показываются выдержки из документации на три серии, в которых гамалеевцы пишут, что в дозе содержится менее 100 RCA на дозу при установленном ими лимите не более 1000. Г-ндон Мендес следом указывает, что это превышает лимиты, установленные FDA и EMA (но об этом позже).

При этом серии, указанные на слайде, - не те, что предполагаются к поставке в Бразилию. Ни УфаВита, ни Генериум не выпускали таких серий. Судя по датам, это препараты, использовавшиеся в I-II фазе и произведённые самим Медгамалом (производственным звеном Гамалеи). То есть ANVISA заключает о наличии RCA на основании документов, причём документов на серии препарата, произведённые ещё до официальной регистрации.

«Качество должно быть единообразно», - возразят знатоки регуляторики. Кроме того, гамалеевцы могли ведь спокойно предоставить уточняющие документы, доказывающие безопасность и ставящие точку в вопросе, есть там RCA или нет. И это тоже резонно.

Но дело в том, что запрос, видимо, уже был, и в РФПИ на него ответили, но этот ответ в ANVISA полностью проигнорировали. Как пишет РФПИ, они ещё за месяц до описываемых событий высылали ANVISA письмо с информацией, что ни в одной серии от Генериума ни одной RCA обнаружено не было. Было ли это просто письмо, или к нему помимо "мамой клянусь" были приложены документы анализа, неизвестно.

Далее ANVISA показывает, что в документах на плацебо из исследования III фазы, в графе про RCA стоит «Not detected». Отсюда, по мнению ANVISA, указанное Гамалеей для препарата «менее 1х10^2» нельзя трактовать как отсутствие RCA. Ведь если RCA ноль, то пишется «Not detected». А значит, заключает регулятор, RCA в препарате всё-таки есть. На этом допущении и построено всё это «реплицирующийся аденовирус бы обнаружен во всех представленных партиях». И это при том, повторимся, что у них на руках были документы об отсутствии RCA, а указанные на слайде препараты вообще из другой серии. Открыть/Комментировать

2021-05-03 18:47:15 В какой капусте нашли Спутник

У вдумчивых подписчиков, ещё в сентябре читавших про устройство векторных вакцин, наверняка возникал вопрос. Окей, у нас есть вектор, который не может размножаться в организме человека, потому что у него удалили части генома, отвечающие за это. И он вроде как должен донести ген S-белка до клетки, проникнуть в неё, обеспечить синтез этого S-белка, плюс-минус интерфероновый гриппоподобный синдром, и на этом, собственно, всё. Но. Как же мы получили все эти десятки миллиардов векторных частиц, если он не умеет размножаться?

На вопрос отвечают Алекс Друзь ван дер Эб и Франк Грэм. Эти два биолога в 70-х проводили эксперименты по встраиванию аденовирусного генома в человеческие клетки. В те времена существовала гипотеза, что это - возможный механизм онкогенеза, поэтому они пытались воспроизвести это в эксперименте. До этого, не без труда, но интеграции генома получилось достигнуть на эмбриональной культуре клеток почек крыс и хомяков, и теперь они взялись за человека.

Теперь они взяли эмбриональные клетки почек человека (Human Embryonic Kidney, HEK), и попытались внести в геном человека кусочек ДНК аденовируса 5-го серотипа. Причём сделали они это при помощи хитрых плазмидных технологий, то есть это не имитация заражения аденовирусом. В домашних условиях ходе обычного заражения такое ещё менее вероятно. Чтобы вы понимали всю сложность процесса и упоротость учёных, у них это получилось только с 293-й попытки. Поэтому линия и носит название HEK 293. На этом фоне Альберт Хофман нервно клеит марки курит в сторонке. При этом из всего генома Ad5 в человечью клетку получилось внести только ген E1 и ещё по мелочи в 19-ю хромосому. И так совпало, что именно этот ген критичен для размножения вируса.

Таким образом они создали клеточную линию, в которой стало возможным выращивать вирусные векторы. То есть теперь можно взять Ad5, убрать из него ген E1, инфицировать им HEK293, и он в ней сможет размножаться. Но попадая в обычную клетку, вектор не сможет делать собственные копии. Profit! Именно поэтому основная часть работ по векторам выполнена на Ad5.

Кроме того, HEK293 отлично растёт в виде суспензии. Значит, её можно культивировать в обычных биореакторах, а не на твёрдой поверхности, как многие другие линии. Нарастили за сутки-двое в колбе, потом разделили на две колбы, ещё подрастили, пересадили в большой биореактор, подрастили, заразили вектором, культивировали. Потом клетки разрушают, из раствора фильтруется вектор, и вуаля.

За время культивирования вируса в хеках происходят триллионы и триллионы циклов сборки векторов. В процессе чисто статистически случается так, что вектор прихватит с собой ген E1 из клетки-хозяина. И таким образом он приобретёт возможность воспроизводиться в других клетках. Это и называется RCA – репликативно-компетентный аденовектор.

Для Ad5 такие есть практически в каждом реакторе на выходе. Вопрос в том, что их настолько ничтожно мало в сравнении с общим количеством вирионов, что придавать им значения смыла не имеет. Инфицирующая доза просто не наберётся. Контролировать этот показатель качества надо, и производитель вакцин устанавливает на него допустимые пороги. У Спутника это не более 1000 частиц на одну дозу в 100 миллиардов векторов.

При выращивании Ad26 образование RCA технически невозможно. Причины этого кроются в большой разнице между геном E1 из HEK293 и генов E1 у Ad26. Они настолько не совпадают, что даже если Ad26 и заберёт себе ген из клетки-хозяина, самостоятельно размножиться с ним он не сможет.

И вот после этого поста мы более-менее готовы обсудить, а в чём же там, собственно, сыр-бор в Бразилии. Но об этом в следующем посте.

А пока продолжаем наблюдение. Искренне ваш, (под)опытный кролик. Открыть/Комментировать